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          • 细胞培养试剂人或各种动物组织单个核细胞分离液
          产品名称:

          细胞培养试剂人或各种动物组织单个核细胞分离液

          产品品牌: 索莱宝 价格:
          厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2016-04-05
          细胞培养试剂人或各种动物组织单个核细胞分离液
          本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 与泛影酸葡甲胺。适用于从各种动物组织样本中分离单个核细胞, 在医疗和医学生物学研究中广泛应用。

          产品概述

          细胞培养试剂人或各种动物组织单个核细胞分离液
          规格:100ml/kit
          保存:室温避光储存,有效期少 2 年。


          产品简介:
              本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 与泛影酸葡甲胺。适用于从各种动物组织样本中分离单个核细胞, 在医疗和医学生物学研究中广泛应用。 其他人及动物多种比重细胞分离液。

              注:因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同,所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。


          一、  分离方法说明及图例
              A.取组织匀浆单细胞悬液(细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml,具体制备方法参照“组织单细胞悬液的制备”)2ml,小心加于2ml本分离液之液面上;
              B. 以400g(约1500转/分)离心15分钟(半径15cm水平转子)。
                 此时离心管中由上下细胞分为四层。 *层; 为胎牛血清液层。 第二层; 为环状乳白色单个核细胞层。 。 。 。
                 第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含4-5ml细胞洗涤液的试管中,充分混匀后,以500g(约1800转/分)离心20分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需单个核细胞。
          注: 提取率约为80%。
          二、组织单细胞悬液的制备
              注:A.本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法 本说明只提供机械匀浆制备单细胞悬液的方法,酶消化法由于各实验室选取的消化酶种类各不相同,请各实验室自行选择进行试验。
              B. 全过程及所需试剂要求无菌环境 全过程及所需试剂要求无菌环境。
              剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量组织匀浆液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪匀浆状,加入5ml组织匀浆液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3 min,再用细胞洗涤液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×108-1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。
              匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70ml组织研磨器内,加入2ml组织匀浆液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨匀浆;用5ml组织匀浆液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网过滤;离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞洗涤液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10 7 个/ml。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或全血及组织稀释液悬起细胞浓度为2×10 8 -1×10 9 个/ml的单细胞悬液备用。


          细胞计数方法:
              细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
               不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
               计数与计算过程
               1)、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
               2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,盖玻片被液体充满为止。
               3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。
               4)、按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×10 4 个/ml×稀释倍数公式中乘以10 4 因为计数板中每一个大格的体积为:
                1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3


          细胞计数要点:
               A. 进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于10 4 个/ml,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm 2 或>500个/10 mm 2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。
               B. 要求细胞悬液中的细胞分散良好,否则影响计数准确性。
               C. 取样计数前,应充分混匀细胞悬液,尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀,以求计数准确;
               D. 数细胞的原则是只数完整的细胞,若细胞聚集成团时,只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线,不计下线,只计左线,不计右线。
               E. 操作时,注意盖玻片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中,否则要重新计数。

           

          三、  注意事项
               A. 本分离液是敏光型的,在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存,启封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品为真空包装,未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶,影响分离效果。
               B. 待分离的样本要求新鲜,避免冷冻和冷藏。分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果好,且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
               C. 由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数,调节离心的时间,摸索的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。
               D. 好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
               E. 优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积 。
          四、产品性能指标

          pH 7.0-7.5
          渗透压 280-340mOsmol/kg
          内毒素 ≤0.5EU/ml
          无菌 直接接种培养14 天后培养基澄清
          澄明度及不溶性颗粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
          含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下


          五、贮藏及保存期限
              18℃-25℃避光保存,有效期两年。启封后置4℃保存,有效期一周。
              注:若保证无微生物污染,启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

           

          细胞培养试剂人或各种动物组织单个核细胞分离液订购说明:

          1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
          2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
          3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
          4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
          5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


          运输说明:

          1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
          2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
          3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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